| ردیابی مولکولی و آنالیز فیلوژنتیکی کوکسیلا بورنتی در شترهای شهرستان سمنان به روش PCR |
| کد مقاله : 1053-CG2024 |
| نویسندگان |
|
امید محمدی *1، حمیدرضا محمدی1، مهران قائمی بافقی2 1دانشگاه سمنان 2دانشگاه فردوسی مشهد |
| چکیده مقاله |
| هدف این مطالعه ردیابی مولکولی و آنالیز فیلوژنتیکی کوکسیلا بورنتی در شترهای شهرستان سمنان به روش PCR می باشد. در این مطالعه از تعداد 50 نفر شتر به روش تصادفی از شهرستان سمنان نمونه گیری صورت گرفت. مراحل استخراج DNA با استفاده از کیت استخراج DNA دنازیست آریا و مطابق با توصیه شرکت سازنده انجام شد. پرایمرها بر اساس ترادف اختصاصی ژن 27kDa outer membrane protein کوکسیلا بورنتی طراحی گردید: `5- AGTAGAAGCATCCCAAGCA -`3 - TGGAAGTTATCACGCAGTTG -`3 `5 پس از آماده سازی مخلوط اصلی واکنش PCR در مجاورت یخ و همگن سازی مخلوط واکنش، با استفاده از پرایمرهای اختصاصی کوکسیلا بورنتی اقدام به تکثیر قطعه هدف طی سیکل های حرارتی و زمانی PCR گردید. پس از آماده سازی و اطمینان از بسته بودن درب تمامی نمونه ها، در دستگاه ترموسایکلر که از قبل برنامه خاص PCR به آن داده شده، قرار گرفت. از الکتروفورز ژل آگارز نیز جهت بررسی، تفکیک و شناسایی محصولات واکنش زنجیره ای پلیمراز استفاده شد. برای الکتروفورز محصول PCR غلظت حدود 1/5 % آگارز به کار رفت. لذا میزان مشخصی از پودر آگارز در بافر 1X TAE با کمک مایکروویو حل شد. الکتروفورز ژل آگارز با ولتاژ ثابت 100 ولت حدودا به مدت 1 ساعت انجام گرفت. بررسی باند مورد نظر در کنار کنترل مثبت تعبیه شده و کنترل منفی (نمونه فاقدDNA) و شاخص وزن مولکولی (مارکر 100 جفت بازی) صورت پذیرفت. هیچ نمونه مثبتی از کوکسیلا برونتی در نمونه های خون گرفته شده از شترها و ردیابی به روش PCR یافت نشد. |
| کلیدواژه ها |
| شتر- کوکسیلا بورنتی-سمنان-PCR |
| وضعیت: پذیرفته شده برای ارائه شفاهی |